【目的】比較不同劑量龍眼果肉醇提物和水提物對東莨菪堿所致記憶獲得性障礙小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響，初步解釋龍眼果肉改善學(xué)習(xí)記憶的作用機(jī)制。

【方法】分析龍眼果肉醇提物和水提物中主要活性物質(zhì)含量。將無特定病原體（SPF 級(jí)）雄性昆明小鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、龍眼果肉醇提物低劑量組/高劑量組（150 mg·kg-1/300mg·kg-1）、龍眼果肉水提物低劑量組/高劑量組（150 mg·kg-1/300 mg·kg-1），共 6 組，連續(xù)灌胃 28 d 后，空白組腹腔注射等量生理鹽水，各試驗(yàn)組腹腔注射東莨菪堿造模，0.5 h 后，以潛伏期和穿梭次數(shù)為考察指標(biāo)，采用避暗試驗(yàn)進(jìn)行行為學(xué)測試，作為習(xí)得成績；24 h 后再次進(jìn)行避暗試驗(yàn)，對小鼠進(jìn)行記憶保持測試，測試結(jié)束后摘眼球取血，脫頸致死，取腦組織進(jìn)行生化指標(biāo)檢測。測定腦組織的膽堿類（乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶 choline acetyltransferase，ChAT 和乙酰膽堿酯酶 acetylcholinesterase，AChE 活力）及抗氧化相關(guān)指標(biāo)（超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）、谷胱甘肽過氧物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活力及丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量），血清中抗氧化相關(guān)指標(biāo)（SOD、GSH-Px 活力及 MDA 含量）。通過綜合比較各組間行為學(xué)試驗(yàn)指標(biāo)、腦組織、血清生化指標(biāo)，判斷龍眼果肉改善學(xué)習(xí)記憶功能的作用效果及作用機(jī)制。

【結(jié)果】分析龍眼果肉提取物成分發(fā)現(xiàn)，龍眼果肉水提物主要為多糖及蛋白質(zhì)，醇提物除含有糖類外，還含有較豐富的酚類、黃酮類和磷脂物質(zhì)，其中，醇提物中總酚、總黃酮、總磷脂含量顯著高于水提物的（P＜0.05）。行為學(xué)試驗(yàn)表明，模型組小鼠在避暗試驗(yàn)中 5 min 內(nèi)穿梭次數(shù)為 2.89 次，是正常小鼠的 6.09 倍，高劑量龍眼果肉醇提物和水提物組小鼠穿梭次數(shù)分別為 0.75 次和 0.56 次，與正常組無顯著差異；癡呆小鼠在避暗試驗(yàn)中的潛伏期僅為正常組的 0.43 倍,與模型組相比，各劑量龍眼果肉醇提物和水提物均能顯著增加癡呆小鼠在避暗試驗(yàn)中的潛伏期（P＜0.05），且存在一定劑量效應(yīng)關(guān)系，其中龍眼果肉醇提物和水提物高劑量組小鼠的避暗潛伏期分別為 289.18 s、290.80 s，與正常組相比無顯著差異（P＞0.05）。生化指標(biāo)方面，與模型組相比，各劑量龍眼果肉醇提物和水提物均能顯著增加癡呆小鼠腦組織中 ChAT 活力，顯著降低 AChE 活力（P＜0.05），且存在一定的劑量效應(yīng)關(guān)系。相同劑量時(shí)，龍眼果肉水提物效果優(yōu)于醇提物，其中龍眼果肉醇提物高劑量組，龍眼果肉水提物低、高劑量組小鼠腦組織中 ChAT 活力基本恢復(fù)正常水平；在抗氧化水平方面，與模型組相比，龍眼果肉醇提物高劑量組顯著增加癡呆小鼠腦組織和血清中SOD、GSH-Px 活力，顯著降低 MDA 含量（P＜0.05），基本達(dá)到正常水平，效果優(yōu)于同等劑量的龍眼果肉水提物。

【結(jié)論】龍眼果肉水提物和醇提物均可改善東莨菪堿誘導(dǎo)記憶獲得性障礙小鼠的學(xué)習(xí)記憶功能，但二者的作用機(jī)制可能存在差異，龍眼果肉水提物主要通過調(diào)節(jié)膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)改善學(xué)習(xí)記憶功能，其主要作用的物質(zhì)基礎(chǔ)可能為多糖或糖蛋白；醇提物則主要通過提高機(jī)體抗氧化活力改善學(xué)習(xí)記憶功能，其主要作用物質(zhì)可能為多酚、黃酮、磷脂等。

關(guān)鍵詞：龍眼果肉；東莨菪堿；學(xué)習(xí)記憶功能；乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶; 抗氧化

1.1 材料與供試動(dòng)物

1.1.1 材料、藥品與試劑 龍眼果干（含水量為12.40%），由廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹研究所提供，品種為‘儲(chǔ)良’；氫溴酸東莨菪堿注射液（scopolaminehydrobromide injection）購于徐州萊恩藥業(yè)有限公司產(chǎn)品；丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）、乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶（choline acetyltransferase，ChAT）、乙酰膽堿酯酶（acetylcholinesterase，AChE）和總蛋白質(zhì)（totalprotein，TP）試劑盒均購于南京建成生物工程研究所。沒食子酸、原兒茶酸、綠原酸、兒茶素、表兒茶素、香草酸、蘆丁、鞣花酸、阿魏酸、異阿魏酸、水楊酸、香豆酸及鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖標(biāo)準(zhǔn)品均購自美國 Sigma 公司，甲酸、乙酸、乙腈為色譜純試劑，購于美國 Fisher 公司。95%乙醇（分析純）購于天津市大茂化學(xué)試劑廠，其余試劑均為分析純。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF 級(jí)雄性 KM 小鼠，體重 20—25 g，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（粵）2011-0015。飼養(yǎng)環(huán)境：室溫（23±2）℃，相對濕度 50%—60%，12/12 h 明暗交替，自由飲食、攝水。小鼠于試驗(yàn)前 7 d 置于實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)環(huán)境。

1.2 主要儀器

XR-XB110避暗系統(tǒng)（上海欣軟信息科技有限公司），SB-5200TD 超聲儀（寧波新芝生物科技股份有限公司），F(xiàn)DU-2110 真空冷凍干燥機(jī)（東京理化器械株式會(huì)社），EYELA CA-2600 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（東京理化器械株式會(huì)社），UV1800 型紫外可見分光光度計(jì)（日本島津有限公司），多功能熒光分析儀 FluoroskanAscent FL（美國 Thermo Fisher Scientific 公司），HZQQX 型全溫振蕩器（哈爾濱東聯(lián)電子開發(fā)有限公司），冷凍離心機(jī)（美國 Thermo Electron 公司），DS-1高速組織搗碎機(jī)（上海標(biāo)本模型廠）、AgilentTechnologies 1260 Series、6890N-5975B GC-MS （美國 Agilent 公司）。

1.3 龍眼果肉提取物的制備

1.3.1 龍眼果肉醇提物的制備 取一定量的龍眼干果肉，按 1﹕4（m/v）加入 95%乙醇打漿，室溫浸泡1 h，超聲提取 30 min，如此反復(fù) 2 次，離心（4 000r/min，10 min）收集上清液，濾渣重復(fù)提取 1 次，合并上清液。55℃減壓濃縮至無乙醇蒸出，此濃縮浸膏即為龍眼果肉醇提物（含水量為 10.86%）。

1.3.2 龍眼果肉水提物的制備 在 1.3.1 離心后的沉淀物中以 1﹕20（m/v）加入蒸餾水，按 1.3.1 的方法提取，收集上清液。將濾渣用 1﹕5 的蒸餾水復(fù)提一次，合并上清液，減壓濃縮后加 95%乙醇沉降（終濃度為80%），4℃冷藏過夜，離心收集沉淀物用無水乙醇洗滌 3 次，冷凍干燥得龍眼果肉水提物。

1.5 動(dòng)物分組及處理

將72 只小鼠隨機(jī)分成 6 組，每組 12 只，分別為：空白組、模型組、龍眼果肉醇提物低劑量組（150mg·kg-1）、龍眼果肉醇提物高劑量組（300 mg·kg-1）、龍眼果肉水提物低劑量組（150 mg·kg-1）、龍眼果肉水提物高劑量組（300 mg·kg-1）。各劑量以提取物干基計(jì)，參照龍眼干果肉每日攝取量（9—15 g）基于人-動(dòng)物劑量轉(zhuǎn)換公式得到，并參考文獻(xiàn)做一

定調(diào)整。各組均按10 mL·kg-1·b.w.-1灌胃給藥（空白組和模型組灌胃生理鹽水），每天一次，連續(xù) 28 d。在*后一次給藥 1 h 后，除空白組腹腔注射生理鹽水外，其他組均腹腔注射東莨菪堿（3 mg·kg-1·b.w.-1）制備小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙模型，并于注射 20 min 后進(jìn)

行避暗試驗(yàn)。

1.6 避暗試驗(yàn)

方法參考DONG 等進(jìn)行并做一些改進(jìn)，該試驗(yàn)分為習(xí)得測試（Acquisition trial）和記憶保持測試（Retention trial）兩部分。小鼠灌胃第 26 天起，連續(xù) 2 d 在同一時(shí)間將小鼠放入避暗儀中適應(yīng) 5 min。第 28 天腹腔注射東莨菪堿20 min 后開始習(xí)得測試，將小鼠背對拱門放入明箱后，給暗室不銹鋼柵欄通以 0.3 mA 電流持續(xù) 5 min，由于小鼠具有趨暗的習(xí)性會(huì)由明室向暗室探索，小鼠一進(jìn)入暗室即受電擊，其正確反應(yīng)是回到明室，記錄小鼠第 1 次進(jìn)入暗室的時(shí)間即為避暗潛伏期（step-throughlatency），步入潛伏期大于 5 min 者棄去不用,5 min 內(nèi)小鼠進(jìn)入暗室的次數(shù)即為穿梭次數(shù)（shuttle number）,作為習(xí)得成績；24 h 后對小鼠進(jìn)行記憶保持測試，記錄小鼠 5 min 內(nèi)的潛伏期及進(jìn)入暗室的次數(shù)（即穿梭次數(shù)），作為記憶成績，5 min 內(nèi)未進(jìn)入暗室的小鼠其潛伏期按 300 s 計(jì)，穿梭次數(shù)計(jì) 0 次。

1.7 小鼠血漿、腦組織內(nèi)生化指標(biāo)檢測行為學(xué)試驗(yàn)結(jié)束后，乙醚麻醉小鼠，摘眼球取血，全血離心后取血清；脫頸椎處死小鼠，迅速于冰上斷頭取腦，加 9 倍體積（m/V）的冰生理鹽水進(jìn)行勻漿，4℃離心（3 000 r/min，10 min），取上清液，即為 10%組織勻漿。分別按照試劑盒表明書測定腦組織勻漿中ChAT 和 AChE 活力，腦組織勻漿和血清中 SOD、GSH-Px 活力及 MDA 含量，采用考馬斯亮蘭法測定組織蛋白含量。

1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

用SPSS19.0 軟件進(jìn)行試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，組間差異比較采用單因子方差分析（one way ANOVA），顯著性用 LSD 法及 Dunnett’s 檢驗(yàn)（P＜0.05），所有數(shù)據(jù)采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x ±sd）表示。