【摘要】 目的 通過觀察蒙醫溫針對**模型大鼠自主活動的影響及對****鈉致睡眠時間的影響,探討蒙醫溫針的改善睡眠作用。方法 ①選用****鈉誘導睡眠的法,取健康雄性 SD 大鼠 30 只,分為空白對照組和蒙醫溫針組,每組 15只,以****鈉致眠時間為觀察指標。②采用對氯苯丙氨酸致**大鼠模型,取健康雄性 SD 大鼠 60 只,分為空白對照組、**模型組、蒙醫溫針組和***注射液組,每組 15 只,觀察大鼠的自主活動和一般情況。結果 蒙醫溫針組****鈉致眠大鼠睡眠潛伏期與空白對照組比較,差異無統計學意義(P＞0.05)。蒙醫溫針組****鈉致眠大鼠睡眠時間與空白對照組比較,差異有統計學意義(P＜0.01)。**模型組、蒙醫溫針組和***注射液組大鼠造模前體重較空白對照組減輕(均 P＜0.01)。**模型組大鼠**后體重與空白對照組比較,差異具有統計學意義(P＜0.01)。蒙醫溫針組和***注射液組大鼠體重增加,與空白對照組比較,差異均具有統計學意義(P＜0.01)。**模型組大鼠活動時間明顯高于空白對照組(P＜0.01)。蒙醫溫針組和***注射液組大鼠活動時間明顯低于**模型組(均 P＜0.05)。**模型組大鼠站立次數明顯高于空白對照組(P＜0.05),蒙醫溫針組和***組大鼠站立次數明顯低于**模型組(P＜0.05,P＜0.01)。結論 蒙醫溫針對大鼠有**作用和改善睡眠功能作用。
【關鍵詞】 針灸療法;蒙醫;睡眠;自主活動;大鼠;**模型
**是睡眠的發生或維持障礙,影響日常生活的一類病癥,屬蒙醫“赫依”病范疇。西醫**本病仍存在難以根治、不同程度地產生**反應、耐藥性和依賴性等問題。通過文獻記載和近年來的臨床觀察發現,蒙醫溫針對**癥的療效顯著,同時具有無毒副反應、**可靠等特點,其*大優勢在于可以避免口服**所致的副反應。因此,尋找適當有效的針刺干預措施是臨床與實驗研究的重要課題之一。本實驗采用****鈉誘導大鼠睡眠的方法,觀察蒙醫溫針對 SD 大鼠睡眠的影響,并選用對氯苯丙氨酸致**大鼠模型,采用曠場試驗(OFT 試驗),觀察**大鼠的自主活動和一般情況,探討蒙醫溫針改善睡眠的作用,現報告如下。蒙醫溫針對大鼠睡眠時間和自主活動的影響
 
1 材料與方法
1.1 實驗動物
健康雄性SPF級SD大鼠80只,體重(180±220)g,由中國人民解放軍**醫學科學院實驗動物中心提供[許可證號 SCXK-(軍)2007-004]。
1.2 主要儀器與試劑
電子天平(BS124S,賽多利斯提供);MLY-Ⅰ型蒙醫療術溫針儀(內蒙古醫學院蒙醫藥學院研制,**號ZL201120058078.0);特制蒙醫銀針(0.5 mm×30 mm,內蒙古元陽中蒙醫科技開發有限責任公司提供);自發活動視頻分析系統(上海欣軟信息科技有限公司提供);****鈉、對氯苯丙氨酸由 sigma 提供;***注射液(2 mL:10 mg)由西安利君沙制藥有限責任公司提供(國藥準字 H61022214)。
2 方法
2.1 蒙醫溫針對****鈉致眠大鼠睡眠時間的影響
2.1.1 實驗分組及處理方法
取大鼠 30 只,隨機分為空白對照組和蒙醫溫針組,每組 15 只。隨機分組標號后,在室溫 18℃～28℃、相對濕度 40%～50%的條件下飼養。蒙醫溫針組根據蒙醫經典理論和臨床**有效穴取頂會穴、赫依穴、心穴,每次取 1 個穴位。頂會穴位于兩眉正中線與兩耳葉上緣連線在頭頂上的交叉處;赫依穴位于第 1 胸椎上凹正中;心穴位于第 7 胸椎下凹正中。將大鼠固定后,用特制銀針斜刺,再接蒙醫療術溫針儀,電流強度為 100 mA,溫度為 40℃,留針 15 min。每日上午 8:00-11:00 進行**,共** 7 d。空白對照組每日同蒙醫溫針組相同方法固定 1 次,每次 15 min,連續 7 d。蒙醫溫針對大鼠睡眠時間和自主活動的影響
2.1.2 觀察指標
兩組**結束后給予腹腔注射****鈉(45 mg/kg),觀察兩組大鼠翻正反射消失和恢復時間,以翻正反射消失至恢復的時間為睡眠持續時間,開始記錄給藥時間、翻正反射消失時間和翻正反射恢復時間,睡眠以翻正反射消失為指標。分別計算出睡眠潛伏期和睡眠持續時間。記錄大鼠腹腔注射****鈉后至翻正反射消失時間為睡眠潛伏期,翻正反射消失至大鼠覺醒的時間為睡眠持續時間。
2.2 蒙醫溫針對**模型大鼠自主活動的影響
2.2.1 造模方法
將 PCPA(300 mg/kg)用弱堿性生理鹽水(pH 值為7～8)配置成混懸液備用。**模型組、蒙醫溫針**組和***注射液組大鼠在實驗前 2 d 每日早晨 8:00開始,按1 mL/100 g 用量腹腔注射 PCPA 混懸液,每日1次,連續注射 2 d。第 1 次腹腔注射PCPA 混懸液 28～30 h 后,大鼠出現晝夜節律消失,活動明顯頻繁,白天也活動不停,興奮性增高,攻擊性增強,飲食及二便顯著增多,鼠毛蓬亂無光澤,大便色灰白,整體觀察與對照組明顯不同,表明**模型成功。
2.2.2 實驗分組及處理方法
取正常雄性 SD 大鼠 60 只,隨機分為空白對照組、**模型組、蒙醫溫針**組和***注射組,每組 15 只,正常飼養 7 d 后予以相應處理。①空白對照組不造模,于實驗前連續 2 d 腹腔注射同 PCPA 用量體積的弱堿性生理鹽水,第 3 天開始實驗,與蒙醫溫針組同樣方法固定 15 min,連續 7 d,其他處理同蒙醫溫針組。②**模型組造模 2 d,第 3 天開始實驗,與蒙醫溫針組同樣方法固定 15 min,連續 7 d,其他處理同蒙
醫溫針組。③蒙醫溫針組造模 2 d,第 3 天開始蒙醫溫針**,連續 7 d,針刺方法同實驗 1。④***注射液組實驗前2 d造模,第3天開始大鼠腹腔注射***注射液,0.92 mg/kg/d,每日 1 次,連續 7 d。
2.2.3 曠場試驗
參照文獻方法采用曠場試驗方法,于**第7天(第 1 次腹腔注射 PCPA 后 7 d),在安靜、暗光條件下檢測。實驗前先置大鼠 1 次單獨放入 OFT-100 自發活動實驗儀(箱子長寬均為 80 cm,高為 40 cm,為內空的立柱體,壁周為透明玻璃)中適應3 min后,操作者握住大鼠尾根部 1/3 處,輕輕將大鼠放入礦場箱中格內,開始同步錄像計時。觀察 5 min 內大鼠活動情況。取出大鼠后,用毛巾蘸清水及低濃度酒精徹底擦拭箱底,避免留有氣味而干擾下 1 只大鼠的觀察結果。
2.3 觀察指標
①中央格停留時間(s),即自大鼠被放入正中格至其有 3 爪跨離該格的時間;②站立次數,即兩前肢向上抬起離開箱底面或攀伏在側壁上,以后腿支撐使身體豎立的次數;③水平活動時間(s),即水平面上活動的時間。蒙醫溫針對大鼠睡眠時間和自主活動的影響
2.4 統計學方法
所有數據采用 SPSS16.0 軟件統計處理,采用兩個獨立樣本的 t 檢驗和卡方檢驗,計量資料以均數±標準差表示,以 P＜0.05 表示差異統計學意義。
3 結果
3.1 蒙醫溫針對****鈉致眠大鼠睡眠時間的影響
由表 1 可見,蒙醫溫針組****鈉致眠大鼠睡眠潛伏期與空白對照組比較,差異無統計學意義(P＞·474· Shanghai JAcu-mox, May 2014, Vol 33, No 50.05)。蒙醫溫針組****鈉致眠大鼠睡眠時間與空白對照組比較,差異具有統計學意義(P＜0.01),提示蒙醫溫針明顯延長****鈉誘導的睡眠時間。
3.2 蒙醫溫針對**模型大鼠自主活動的影響
空白對照組大鼠睡眠、飲食等方面無明顯改變。**模型組、蒙醫溫針組及***注射液組大鼠于第 1 次腹腔注射 PCPA 混懸液 28～30 h 后,晝夜節律消失,白天活動增多,飲水進食減少;隨**時間的延長,大鼠疲憊、煩躁、皮毛蓬亂無澤愈加明顯,對聲音、光等刺激的警覺性減弱,飲食及二便增多,攻擊性增強。整體觀察與對照組明顯不同,與文獻報道一致,表明模型復制成功。至造模第 8 天,即實驗當天**模型組大鼠仍存在上述行為改變。蒙醫溫針組和***組大鼠在予以針刺刺激和***注射后,表現為安靜、活動減少等現象,睡眠時間、飲水進食、精神狀態等均逐漸恢復。
3.2.1 4 組大鼠不同時間點體重比較
入組時各組大鼠體重無明顯差異(P=0.202,F=1.595)。造模前,各組大鼠體重無明顯差異(P=0.701,F=0.474)。各組大鼠**前體重間有顯著性差異(P=0.000,F=11.156),**模型組、蒙醫溫針組和***注射液組較空白對照組減輕(均 P＜0.01)。**后,**模型組大鼠體重與空白對照組比較,差異具有統計學意義(P＜0.01)。蒙醫溫針組和***注射液組大鼠體重增加,與空白對照組比較,差異均具有統計學意義(P＜0.01);蒙醫溫針組和***注射液組大鼠體重與空白對照組比較,差異均無統計學意義(P＞0.05)。
3.2.2 4 組大鼠曠場實驗水平活動和垂直活動參數比較
由表 3 可見,在水平活動上,**模型組大鼠活動時間明顯高于空白對照組大鼠(P＜0.01),**模型組大鼠在中央格停留時間有增高的趨勢,但與空白對照組大鼠比較,差異無統計學意義(P＞0.05)。蒙醫溫針組和***注射液組大鼠活動時間明顯低于**模型組大鼠(均 P＜0.05)。在垂直活動上,**模型組大鼠站立次數明顯高于空白對照組大鼠(P＜0.05),蒙醫溫針組和***組大鼠站立次數明顯低于**模型組大
鼠(P＜0.05,P＜0.01)。
4 討論
**癥屬蒙醫“身、心、語”功能紊亂而引起人體“三根”平衡失調而導致的“赫依”病。**的關鍵在于調節“三根”平衡,疏通筋脈,促使機體歸于“三根七素”相對平衡狀態,恢復正常生理功能。蒙醫溫針是集針刺效應、溫熱效應以及穴位特異性刺激為一體,通過抑制“赫依”,平衡“三根”的作用達到****的目的。頂會穴、赫依穴、心穴是臨床用于****癥的主要穴位。頂會穴具有**、調神之功效,對**“赫依”性喑啞、神志不清、癲狂、視力減退、頭暈、**等起主要作用;赫依穴對**癲狂、心悸、激蕩、婭結、夜不能寐、舌苔灰白、頸項強直等赫依性**起主要作用;心穴位對**心悸、心抖、癲狂、巴達干赫依性心病、**、譫妄、納呆、神志昏迷等起主要
作用。蒙醫溫針療法是一種行之有效的****的方法。本實驗中用到的蒙醫溫針儀是結合現代電子技術研制而成,可以達到傳統蒙醫溫針的作用,且具有操作簡便、溫度可調,**等特點。睡眠時間是評測睡眠質量的重要指標。****鈉為一種**神經抑制藥,低劑量時主要抑制腦干網狀上行激活系統,大劑量則對**神經系統起廣泛抑制,從而出現**、催眠、麻醉作用,故在一定閾劑量下可致大鼠睡眠。因此選用****鈉誘導大鼠睡眠是被廣泛采用的**催眠實驗基礎指標。在于觀察蒙醫溫針與****鈉的協同作用。以往文獻對****鈉劑量的報道不一,且大鼠自身對****鈉的敏感性也存在差異。因此,前期實驗先對****鈉的閾劑量進行了摸索,結果致大鼠全部睡眠的****鈉閾劑量值為 45 mg/kg。本實驗結果顯示,蒙醫溫針與****鈉有協同作用,可延長****鈉誘導大鼠睡眠的時間(P＜0.01),提示蒙醫溫針具有**催眠的作用。行為是機體的重要功能表現之一,動物的行為是在神經、***系統和運動器官的共同協調作用下形成的,其中以神經調節為主。對行為學進行評估時神經、***等研究領域的重要組成部分。目前行為學評價方法有很多種,如觀測大鼠的一般情況、探究行為、情緒反應、體力情況等。本實驗采用曠場實驗來評價**大鼠模型的行為學變化。曠場實驗是評價實驗動物在新異環境中自主行為、探究行為與緊張度的一種方法。本實驗在**模型大鼠造模過程中,從大鼠一般行為觀察發現,**后的大鼠飲食、能量消耗增加,體重下降。大鼠表現倦怠、體毛蓬亂、無光澤。在行為上,長時間**后的大鼠興奮性提高,探究行為和攻擊性增強,對環境刺激的警覺性和攻擊性行為增加。至實驗當天時(**次腹腔注射 PCPA 后 7 d),**模型組大鼠仍存在上述行為異常。蒙醫溫針組和***注射液組大鼠在予以針刺刺激和***注射后,睡眠時間、精神狀態、飲水進食、體重等均逐漸恢復。曠場實驗的參數一般有水平運動參數、垂直運動參數和中央格停留時間。水平運動參數有跑動的距離、速度、時間等,這些參數反映動物的活動度;垂直活動指的是動物的站立、攀壁、修飾等行為,反映動物對新鮮環境的好奇程度。在曠場實驗中大鼠增加在中央格停留時間,減少外周格時間,顯示更少的焦慮樣行
為。本實驗結果顯示,**模型組大鼠在曠場中央格停留時間高于空白對照組,顯示出**模型組比空白對照組減少了焦慮樣行為;**模型組大鼠活動時間和站立次數明顯高于空白對照組(P＜0.01,P＜0.05),顯示模型組的探索性行為增強。蒙醫溫針組大鼠在曠場實驗中活動時間及站立次數均明顯低于**模型組(P＜0.01,P＜0.05),曠場中央格停留時間也比模型組低,表明蒙醫溫針能夠改善**所致大鼠焦慮樣行為減少和探索行為和探索行為增強的異常變化。通過實驗研究發現,蒙醫溫針改善**的時間、一般情況和行為學改變的作用和***注射液的作用無差別,表明蒙醫溫針同***注射液一樣,可以改善**大鼠的行為、情緒變化,緩解大鼠的緊張程度,有**催眠的效果。
**導致的煩躁、倦怠等異常行為和情緒變化不僅影響到人的生活質量,更會影響人的認知、記憶能力。蒙醫溫針能延長**時間的同時有效調節**模型大鼠精神情緒行為的異常,提示蒙醫溫針具有改善睡眠、**、**的作用,而其**機制還有待進一步研究。