摘要】　目的　 探討應(yīng)激對(duì)大鼠行為的影響及谷氨酰胺 (Gln) 的調(diào)節(jié)作用。方法　 選用 W istar 大鼠 30 只 , 隨機(jī)分為三組: I組為對(duì)照組,II 組為應(yīng)激組, III組為應(yīng)激+ Gln 組。其中I 、 II 組飼以普通飼料, III組給予補(bǔ)充 2% Gln 的飼料。飼養(yǎng) 2 周后, 以光電刺激作為應(yīng)激條件, 在II組和III組大鼠建立應(yīng)激模型, 觀察應(yīng)激大鼠在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)和避暗實(shí)驗(yàn)中的行為改變以及 Gln的作用。 結(jié)果　 與I組和III組相比, II組大鼠在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中的自發(fā)活動(dòng)明顯增多, 避暗反應(yīng)率則顯著降低, 而I組與III組無顯著差異。 結(jié)論　 應(yīng)激可使大鼠的行為發(fā)生異常改變,而 Gln 則對(duì)其具有一定調(diào)節(jié)作用。
【關(guān)鍵詞】　應(yīng)激　行為　谷氨酰胺

大量資料證明, 強(qiáng)烈應(yīng)激尤其是長(zhǎng)期慢性應(yīng)激嚴(yán)重影響著人類的身心健康, 并導(dǎo)致情緒和行為的異常。本實(shí)驗(yàn)在有關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上, 建立心理應(yīng)激模型, 觀察其對(duì)大鼠一般行為的影響, 并對(duì) Gln在機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)中的作用進(jìn)行初步探討。
材料與方法
一、動(dòng)物及分組情況: 選用生長(zhǎng)期 W istar 大鼠30 只 , 雌雄各半, 體重 100± 20g, 隨機(jī)分為三組: I組為對(duì)照組, II組為應(yīng)激組, III組為應(yīng)激+ Gln 組。其中 I、 II組飼以普通飼料, III組給予補(bǔ)充 2% Gln的飼料。各組動(dòng)物均于不銹鋼籠中單籠飼養(yǎng), 自由攝食飲水, 每周稱量一次體重。
二、應(yīng)激模型的建立: 動(dòng)物飼養(yǎng) 2 周后, 以燈光和足底電擊作為條件和非條件刺激, 在II組和III組動(dòng)物建立應(yīng)激模型, 實(shí)驗(yàn)裝置及方法如下: 實(shí)驗(yàn)箱大小為 30 × 25 × 18cm , 箱底部由直徑 0.4cm、間隔0.5cm、可以通電的不銹鋼棒構(gòu)成, 箱頂部裝有閃光燈。實(shí)驗(yàn)時(shí), 將大鼠放入箱內(nèi)適應(yīng) 1m in 后給予間斷不規(guī)則的光電刺激 (電擊參數(shù): 40～ 60V , A C , 每隔 5～ 15 秒刺激 0.5～ 5 秒) , 持續(xù) 5m in, 如此重復(fù) 6 天,于第 7 天僅給與燈光刺激而不給電擊。
三、觀察指標(biāo)及測(cè)定方法
1. 自發(fā)及探究行為: 在動(dòng)物應(yīng)激期結(jié)束后采用曠場(chǎng)行為實(shí)驗(yàn)法 , 觀察動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)箱內(nèi)的自發(fā)及探究行為。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)箱由上海欣軟信息科技有限公司提供。實(shí)驗(yàn)裝置及方法如下: 實(shí)驗(yàn)箱大小為 100× 100× 50cm , 底板用SuperMaze軟件自動(dòng)分成 25 方格。 實(shí)驗(yàn)時(shí)將動(dòng)物放在正中格中, 記錄其 5m in 內(nèi)的活動(dòng)情況, 包括中央格內(nèi)停留時(shí)間、穿行格數(shù)、直立次數(shù)及修飾次數(shù)等。
2. 避暗反應(yīng): 避暗實(shí)驗(yàn)箱由上海欣軟信息科技有限公司提供，分大、小兩間, 小間為25× 15× 18cm , 亮燈且箱底部無電, 大間為 25× 30× 18cm , 黑暗且箱底通電。實(shí)驗(yàn)時(shí), 將動(dòng)物置于亮燈一側(cè), 觀察 5m in 內(nèi)動(dòng)物的避暗反應(yīng)情況。
3. 血漿中糖皮質(zhì)**和促腎上腺皮質(zhì)**(A CTH ) 含量: 將動(dòng)物斷頭處死后取血, 以 1% 肝素抗凝, 3000rpm 離心 15m in 后取上清液, 用德普生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的放免試劑盒測(cè)定糖皮質(zhì)**及 A CTH。
四、統(tǒng)計(jì)分析: 實(shí)驗(yàn)結(jié)果以 x ± s 或中位數(shù) (M )表示, 曠場(chǎng)行為指標(biāo)、避暗潛伏期和逃避時(shí)間用秩和檢驗(yàn), 反應(yīng)率用 ?2 檢驗(yàn), 其余用 t 檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。
結(jié) 果
一、血漿中糖皮質(zhì)**及 A CTH 水平: 表 1 結(jié)果顯示, II、 III組大鼠血漿中糖皮質(zhì)**顯著高于I組 ( P < 01 01 ) , 表明這兩組大鼠均處于應(yīng)激狀態(tài)。但III組與II組相比明顯降低 ( P < 01 05) , 提示補(bǔ)充Gln 可減輕機(jī)體的應(yīng)激反應(yīng)。血漿中 A CTH 水平三組間無顯著性差異。

二、曠場(chǎng)行為
從表 2 可以看出, 與I組和III組相比, II組大鼠在中央格內(nèi)的停留時(shí)間明顯縮短, 穿行格數(shù)則顯著增多 (P < 01 05) , 直立和修飾次數(shù)無顯著差異, 表明應(yīng)激使大鼠自發(fā)活動(dòng)增多, 而補(bǔ)充 Gln 可使應(yīng)激大鼠活動(dòng)減少。

三、避暗反應(yīng): II組大鼠的避暗反應(yīng)率僅 50% ,顯著低于I組 ( P < 01 05) , III組則介于I組和II組之間, 但與二者均無顯著性差異 (表 3)。II組大鼠的潛伏期和逃避時(shí)間與I組和III組相比雖有降低趨勢(shì), 但差異沒有顯著性。

討 論
一、大鼠心理應(yīng)激模型的建立: 心理應(yīng)激是指機(jī)體通過認(rèn)知、評(píng)價(jià)而察覺到應(yīng)激源的威脅時(shí)所產(chǎn)生的心理生理機(jī)能改變的過程。關(guān)于心理應(yīng)激模型, 文獻(xiàn)報(bào)道較多的是束縛和電擊, 但都不可避免地帶有軀體應(yīng)激成分。 本實(shí)驗(yàn)采用了*近文獻(xiàn)報(bào)道的一種較“純粹”的心理應(yīng)激模型 , 即以燈光和電擊分別作為條件和非條件刺激建立條件反射。 當(dāng)僅有燈光出現(xiàn)時(shí), 動(dòng)物依然會(huì)產(chǎn)生緊張和恐懼心理, 而此時(shí)的軀體刺激已減少到極小, 因此主要是心理應(yīng)激成分在起作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示, 應(yīng)激大鼠血漿中糖皮質(zhì)**顯著增高, 表明應(yīng)激模型是可行的。
二、應(yīng)激對(duì)大鼠行為的影響及 Gln 的作用: 一般認(rèn)為, 應(yīng)激引起下丘腦垂體腎上腺軸的活動(dòng)增強(qiáng),通過糖皮質(zhì)**發(fā)揮作用, 從而導(dǎo)致一系列代謝和機(jī)能的改變。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出, 應(yīng)激對(duì)大鼠的行為產(chǎn)生了一定的影響。在曠場(chǎng)行為實(shí)驗(yàn)中, 應(yīng)激大鼠在中央格內(nèi)的停留時(shí)間縮短, 穿行格數(shù)增多, 表明大鼠活動(dòng)增加, 可能是應(yīng)激早期的焦慮表現(xiàn)。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)主要反映了動(dòng)物的自發(fā)行為和探究活動(dòng), 其活動(dòng)數(shù)在一定程度上表明了 CN S 的興奮或抑制狀態(tài)。有研究表明, 急性應(yīng)激期動(dòng)物行為活動(dòng)增多, 而慢性應(yīng)激期減少, 由此推測(cè)本實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)激大鼠可能尚處于急性期。
避暗是鼠類的一種習(xí)性。在本實(shí)驗(yàn)中, 應(yīng)激組大鼠有 50% 在 5m in 內(nèi)不進(jìn)入暗室, 而進(jìn)入暗室者其潛伏期和逃避時(shí)間均較短, 這反映了應(yīng)激大鼠行為的異常; 同時(shí)又說明應(yīng)激大鼠抑郁和緊張、焦慮同時(shí)存在的矛盾心理, 表明了動(dòng)物行為的復(fù)雜性。這種復(fù)雜性可能與造成應(yīng)激狀態(tài)的刺激方式有關(guān)。
近年來, 人們?cè)噲D從營(yíng)養(yǎng)和食物途徑尋找減輕應(yīng)激損害的方法并取得了一些進(jìn)展。 如有資料表明, 具有抗氧化作用的維生素如 V C、 V E、 Β- 胡蘿卜素和一些蔬菜、水果可能有潛在的抗應(yīng)激作用。由本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見, 補(bǔ)充 Gln 使應(yīng)激大鼠的自發(fā)活動(dòng)減少, 這可能對(duì)應(yīng)激早期的過度興奮所致的大鼠情緒和行為異常有一定改善作用。有文獻(xiàn)報(bào)道, 給臨床病人補(bǔ)充 Gln 在促進(jìn)病人康復(fù)的同時(shí)可對(duì)其情緒產(chǎn)生改善作用 , 這與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本一致。