常規動物實驗模型制作（復制）方法
一、腫瘤動物模型的建立
將對數生長的腫瘤細胞收集 ， 用無血清基質 10.0ml， 于 1500 轉/ 分， 離心3min， 連續洗 3 次， *后用無血清基質混勻， 用血球計數器計算腫瘤細胞數量( 平均 5 個中方格的細胞計數×104即是腫瘤數/ 毫升) 。 計算完腫瘤細胞總數， 再將 腫瘤細胞密度調至 4×106 個/ml， 每只小鼠腋下接種 50ul(即 2×105個腫瘤細胞)， 2周左右可捫及腫瘤小節結。一般選取 6-8 周的小鼠，不同的腫瘤細胞接種的數量和動物不一樣， 比如 LL/2，B 16， Hep 可接種 C57 和 BAL B/C 小鼠， NS-1，EL-4， C26，Meth A 可接種 BAL B/C 小鼠， H22接種昆明鼠。從腫瘤接種后可捫及小結節開始， 每 3 天用游標卡尺量腫瘤縱橫大小( 單位：mm)， 至少連續一個月時間。
注意要設計不同的實驗組和對照組， 每組動物數一般為 5-10 只， 一般接種腫瘤6-8 周后，小鼠的腫瘤可生長至直徑為 15-20mm ( 即小鼠會瀕臨死亡) 時， 可眼球取血，分離血清并保存血清， 處死小鼠， 取腫瘤組織照相， 取部分腫瘤組織作 冰凍組織切片( 或- 80℃ 保存)， 作相應的**組織化學染色 ， 取部分腫瘤組織用3%中性的甲醛固定， 石臘包埋， 作常規HE 染色。
二、神經系統**動物模型復制方法
1、腦瘤模型可用甲基膽蒽等化學致癌埋于皮層，或用腫瘤移植的方法復制腦腫瘤。
2、腦卒中模型常用顯微手術結扎大鼠、貓、狗的大腦中動脈和將自凝血塊注入頸內動脈，引起梗塞。
3、癲癇模型家兔肌肉注射馬桑內酯或噪音刺激大鼠等方法常用作復制癲癇模型。
4、腦水腫模型于頸內動脈內注入傷寒內**制作急性模型或外力作用引起外傷性腦水腫。
三、消化系統**動物模型復制方法
1、病毒性肝炎模型 常用方法是注射乙型肝炎病人血清復制乙型肝炎模型。膽大部分實驗動物對甲型肝炎病毒不易感。我國已有報導紅面獼猴、恒河猴、人及野生樹鼩種毒后出現人甲型肝炎現象。近年來發現某些鴨肝炎病毒的特征與人肝炎病毒十分相似，故用鴨作為人肝炎模型也開始增多。
2、**性肝炎模型 慢性或遷延性肝炎患者體內存在著抗肝細胞成分抗體。1959年國外有人用肝組織懸液加弗氏佐劑**豚鼠，成功地誘發了肝細胞變性及壞死等病變。也有人報導肝膜蛋白（LSP）加佐劑分次注射產生動物**性肝炎模型。
3、胃、腸道潰瘍模型 在動物身上復制胃、腸道潰瘍的方法較多，但所用的方法不同，引起的潰瘍病變也各有特點。常用的方法有：
（1）．應激法 以各種強烈的傷害性刺激（如強迫制動、饑餓、寒冷等），引起動物發生應激性潰瘍。如把動物浸入冷水中或放在應激箱中不斷地遭受電刺激，使之劇烈不安，一晝液即能引起胃粘膜出血及潰瘍。這種方法簡單，成功率達99%以上。
（2）．**法 給動物投服或注射一定量的組織胺、胃泌素、腎上腺類固醇、水楊酸鹽、血清素、利血平、保泰松等可造成動物胃腸潰瘍。如給豚鼠小劑量的組織胺，連續數天，可引起胃、十二指腸、食道等發生潰瘍。又如可用利血平、血清緊張素、阿斯匹林等誘發大白鼠或小白鼠的胃潰瘍。
（3）．燒灼法 用電極燒灼胃底部的胃壁，可造成象人的胃潰瘍病變；用濃醋酸給大鼠胃壁內注射或涂抹于胃壁漿膜面上可造成慢性潰瘍。燒灼法復制胃、腸道潰瘍模型的優點是方法簡便，潰瘍部位可由作者自己選擇。
（4）．結乳幽門法 選用大鼠、小鼠或豚鼠，麻醉后，無菌技術下在劍突下由腹正中切開腹壁皮膚及肌層，切口長約3cm，暴露胃，沿胃向右，辯清幽門和十二指腸的聯結處，避開血管，于其下穿線，將幽門完全結扎。術后**禁食禁水。幽門結扎后，可刺激胃液分泌并使高酸度胃液在胃中潴留，造成胃潰瘍。這類潰瘍復制方法簡單，發生快，成功率高，但病變較表淺，嚴格地說仍然屬于胃粘膜急性出血性糜爛，與人類胃潰瘍的典型病變差距較大，適于作探索抗潰瘍病**研究和胃潰瘍發病學方面的研究。
其他還可用外科手術方法從腸道上部排除可中和胃酸的堿性膽汁、胰液或十二指腸液造成潰瘍。還可用刺激、損傷或毀損腦組織等方法造成潰瘍。
4、胰腺炎模型 復制胰腺炎模型可采用使胰液外分泌發生潴留；使各種胰酶在胰管系統內活化；感染或某些微生物**的作用，影響胰腺的營養、代謝等。實驗動物選用狗、兔和大鼠。將狗自身膽注按0.5ml/kg體重緩慢注入狗胰腺體尾交界處的胰腺實質內，則可引起胰腺局部組織壞死及炎性浸潤，與人類急性胰腺炎和病變相似。用大腸桿菌懸液9億/ml，按1ml/kg體重，向兔胰管內逆進注射可誘發急性胰腺炎。另外也可采用大鼠腹腔內連續注射乙硫胺酸誘發成功胰腺炎模型。隨著乙硫胺酸注射時間的延長，胰腺組織可以出現廣泛進行性破壞和退化及胰酶水平的持續下降。常規動物實驗模型制作（復制）方法
5、糖尿病模型 糖尿病模型的復制方法采用注射致高血糖因子；手術切除胰腺的全部或大部；用四氧嘧啶（Alloxan）破壞胰島β細胞，造成胰性糖尿病；注射根皮苷使腎小管對糖的再吸收發生障礙并破壞酯酶致使葡萄糖磷酸化過程和脫磷酸過程障礙，引起根皮苷糖皮。四氧嘧啶復制的糖尿病動物模型是目前研究人類糖尿病較好的方法，其實驗性糖尿病近似人類糖尿病，體內代謝障礙時有可能產生此種衍生物，胰島外分泌部不受損傷，幾乎所有常用實驗動物都可用來進行實驗研究。模型胰島的β細胞不是功能消失，而是功能不同程度的降低，有利于研究胰島組織再生和功能恢復，動物不必注射胰島素即可存活很久。大鼠造型劑量為12mg/100g體重，家兔為150～200mg/kg體重，狗約為50～60mg/kg體重。家兔根皮苷皮糖尿病造型劑量為0.5%根皮苷按15m/kg體重，皮下注射。注意所用四氧嘧啶和根皮苷溶液必須現配現用。
四、呼吸系統**動物模型復制
1、慢性支氣管肺炎模型 常選用大鼠、豚鼠或猴吸入刺激性氣體（如二氧化硫、氯、氨水、煙霧等）復制人類慢性氣管炎。現發現豬粘膜下腺體與人類相似，且經常發生氣管炎及肺炎，故認為是復制人類慢性氣管炎較合適的動物。用去甲腎上腺素可以引起與人類相似的氣管腺體肥大。
2、肺氣腫模型 給兔等動物氣管內或靜脈內注射一定量木瓜蛋白酶、菠羅蛋白酶（Bromelin）、敗血酶（Alcalas）、胰蛋白酶（Trypsin）、致熱溶解酶（Thermolysin），以及由膿性痰和白細胞分離出來的蛋白溶解酶等，可復制成實驗性肺氣腫。以木瓜蛋白酶形成的實驗性肺氣腫病變明顯而且典型，或用瓜蛋白酶基礎上再加用氣管狹窄方法復制成肺氣腫和肺心病模型，其優點是病因病變更接近于人。猴每天吸入一定深度的SO2和煙霧（**絲50g，持續2.5小時），一年后，可出現不同程度的肺氣腫。這種模型比較符合人的臨床發病規律，有利于進行肺氣腫的病理生理及****研究。還可用1%三氯化鐵水溶液1～3ml，自兔耳靜脈注入，每周2～3次，可在短期內造成肺心病模型。
3、肺水模腫型 用氧化氮吸入可造成大鼠和小鼠中毒性肺水腫，或用氣管內注入50%葡萄糖液（家兔及狗分別為1及10ml）引起滲透性肺氣腫。麻醉下用37～38℃生理鹽水注入兔頸外靜脈或股靜脈使血液總量增加0.6～1倍（血液總量相當體重1/12），可形成稀血性多血癥肺水腫。切斷豚鼠、家兔、大鼠頸部兩則迷走神經可引起肺水腫。家兔（1.5～2kg）耳靜脈注入1∶1000腎上腺素0.54～0.6毫克，可使動物發生肺水腫并在5～15分鐘死亡，肺系數自4.1～5g/kg增至6.3～12.5g/kg；5mg腎上腺素肌注，8分鐘左右大鼠死亡，肺系數20g/kg，靜脈注入10%氯仿（兔0.1ml/kg，狗0.5ml/kg）也可引起急性肺水腫。腹腔注入6%氯化銨水溶液可引起大鼠（0.4ml/kg）、豚鼠（0.5～0.7ml/kg）肺水腫。
4、支氣管痙攣、**模型 常選用豚鼠復制急性過敏性支氣管痙攣。用生理鹽水配成1∶10雞蛋白溶液作致敏抗原，給每只（250g體重）豚鼠腹腔內注射0.5ml，致敏注射后1周，動物對抗原的敏感性逐漸升高，至3～4周時*高。此時再用1∶3雞蛋白2ml加弗氏完全佐劑霧化（在霧化室內），致敏動物在此霧室內十幾秒鐘到數分鐘內，就出現不安，呼吸加緊加快，然后逐漸減慢變弱，甚至出現周期性呼吸，直到呼吸停止而死亡。如果動物致敏程度較輕或誘發時雞蛋白噴霧的濃度很快，則只發生一時性的支氣管痙攣，并不死亡。如改用組織胺噴霧，則不必予先致敏，就能引起豚鼠支氣管痙攣。組織胺用量依霧室大小而定，在83～103容量時，1∶1000組織胺的用量0.5～1ml。
狗每周兩次暴露于犬弓蛔蟲（Toxocaracanis）、豬蛔蟲（Ascaris suum）或混合草籽浸出物的氣溶膠中可引起實驗性**。給用10-8稀釋豬蛔蟲浸出物皮試陽性狗以豬蛔蟲氣溶膠吸入，也可引起**。常規動物實驗模型制作（復制）方法
5、實驗性矽肺模型 常選用大鼠、家兔或狗、猴來復制模型。取一定量含游離SiO299%以上的DQ-12型石英粉，經酸化處理后，選取尖粒95%在5μm以下的那一段混懸液，烤干后準確稱取需用量加生理水制成混懸液（**），大鼠用50mg/ml，每只氣管內注入1ml；家兔用120mg/ml，用塵量按120mg/kg體重計算，在暴露氣管后注入，均可復制成典型的矽肺模型。
五、心律失常動物模型的復制
根據不同的實驗目的，既可在整體動物身上復制心律失常，也可用離體心臟或心臟某部分組織塊體外灌流復制心律失常。常用的復制方法，有下列幾種：
1．心房撲動和顫動性心律失常 選用狗、貓等動物，麻醉后開胸，暴露心臟，在人工呼吸下進行實驗。可用高頻率電直接刺激心房壁，使每次刺激落心房肌復極時R或S波間隔；烏頭鹼溶液涂抹心房外面局部；擠壓動物上下腔靜脈間的部位，同時給予電刺激；竇房結動脈內注入乙酰膽鹼或甲狀腺素制劑。或采用動物整體閉胸條件下，阻塞呼吸道或吸入低氧氣體。也可采用離體心房組織塊作實驗，將含有竇房結的哺乳動物的離體心房組織塊浸放于低鉀溶液內。
2．心室心動過速和心室顫動性心律失常 多選用狗、貓或兔、大鼠等整體心臟（開胸或閉胸）進行實驗。常使用造型**為烏頭鹼、洋地黃及腎上腺素。一般使用烏頭鹼緩慢靜脈注射造型。劑量：家兔100～150μg/kg，大鼠30～50mμg，小鼠5mμg。也可使用中毒劑量的洋地黃類**造型。還可使用高濃度的腎上腺素（豚鼠40μg/kg，貓、犬100μg/kg）快速靜注，可造成動物多源性早搏、短陣性室性心動過速等。這類模型可用于篩選抗心律失常**。其優點為心律失常在幾分鐘自行消失，因此同一動物可反復多次進行心律失常實驗，便于觀察抗心律失常**作用的持續時間，并可進行自身對照。
3．房室傳導阻滯和房室交接區傳導常性心律失常 多選用狗、貓，在麻醉開胸暴露心臟的情況下，于距犬心尖部1.5～2cm處的左室心肌內注入熱生理鹽水（80～90℃）或95%酒精、25%硫酸10～15ml (貓和兔注入4～7ml)，引起心肌大片的局部壞死性心律失常。也可在狗的房室交接部（即在左心房下部、心房、下腔靜脈和前房室溝三者交匯點的前上方約0.5cm處），用注射針頭垂直刺入房間隔下部房室結區，緩緩注入95%或無水酒精2～5ml，造成核處組織壞死。還可采用豚鼠，自左心耳向左房內注射腺苷5 μg,，注后1秒鐘左右，即出現典型的Ⅱ度或Ⅱ度以上的傳導阻滯，較嚴重時，房室完全停搏，停搏時間與劑量呈平行關系，心率和心律僅在數秒或十幾秒即可恢復。此模型重復性好，但傳導阻滯持續時間短，不易用其進行**觀察，如果注射腺苷劑量大，則傳導阻滯不易復原。除豚鼠外，腺苷對其他動物一般不引起傳導阻滯。
4．竇房結心律失常 用雄性家兔，將細鋼絲變成直徑約0.8cm的半環，纏繞少許棉花。以40%甲醛浸潤后，把此環放在上腔靜脈根部與右心房交界處1分鐘，動物迅速出現心電圖改變，心率減慢50%左右，約6～8分鐘減至*低水平；P波多在1～2分鐘內消失，形成交界性心律；在3～10分鐘內發生ST段偏移（抬高、下降或先升后降）；在心電圖改變的同時，伴有動脈壓下降，在第8分鐘降至*低水平。此方法造成的病竇成功率高，持續時間長（可達5小時），重復性好，模型較穩定，發病機制及心電圖表現與臨床相。常規動物實驗模型制作（復制）方法
六、Alzhermer病的動物模型
SD大鼠200-250克。用3%****鈉(35-40mg/kg體重)腹腔麻醉動物后，固定在腦立體定位儀上(參照大鼠全腦立體定位圖譜)，以前囟為零點，選出進刀坐標：前后坐標(AP)1.8mm，中線旁開(L)坐標1.0mm，腹側坐標(v)4. 0mm。首先用牙科鉆在上述坐標的鉆孔開骨窗，去除顱骨，挑開硬腦膜，用自制雙刃不銹鋼刀片(寬2mm，厚0.1mm)按上述坐標從腦冠狀面插入腦內。然后，將刀向外移動1.5mm，再降刀1mm，并上下抽刀10余次，以完全切斷彎窿海馬傘。*后將刀片退至L1.0mm處，抽出刀片。
動物分組
1. 實驗組：10只，按上述方法切斷左側穹窿海馬傘；
2. 假手術組：10只,開顱并挑開硬膜膜，切斷皮質，但不切斷穹窿海馬傘，*后縫合頭皮；
3. 空白對照組：10只，做水迷宮行為學檢測和電生理檢驗。以Morris水迷宮行為學檢測。（提供兩種數據）定位航行能力。
七、神經系統**模型
實驗性變態反應性腦脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis,EAE) 是一典型的實驗模型。早在1944年Ferraro根據對一系列實驗結果的總結，指出EAE和人的脫髓鞘病有相似之處。1947年Freund等報告,以腦或脊髓加Freund佐劑(FA) 進行**，僅需一次注射就能引起豚鼠EAE，而且成功率相當高。以后，以兔、小鼠、大鼠、 羊、貓、田鼠及猴等動物用同樣方法均能復制成功，以豚鼠*為敏感。這里介紹用同種脊髓加FA進行**復制EAE的方法。
Freund氏左劑的制備參照Paterson的制法,液體石臘(c.p)8.5ml，無水羊毛脂(c.p)1.5ml，結核菌。用上述混合液配成4mg/ml的FA。高壓**后使用。
脊髓組織懸液：于實驗當時，在無菌條件下先將豚鼠肝素化，然后經胸主動脈用生理鹽水灌洗至無血。取出脊髓，除去脊膜，稱重，用玻璃研磨器將脊髓研成勻漿，以生理鹽水配制成50％懸液。
脊髓-FA乳劑的制備：將脊髓組織懸液與FA按1:1混合，用注射器反復抽注，即成乳劑。
選用體重400g左右的豚鼠，于豚鼠的四個足掌肉墊各注射脊髓-FA 0.1ml， 每只豚鼠共注射0.4ml。注射后按常規飼養。
**注射半月后，血清中逐漸出現抗脊髓抗體，皮膚試驗呈延緩反應，而且豚鼠陸續出現后肢癱瘓，甚至大小便失禁，很易死亡。血清補體結合反應：由豚鼠心臟抽血，以3，000轉/分離心30分鐘分離血清。 抗原為1％脊髓生理鹽水懸液，也經3，000轉/分離心1小時，取其上清液作試驗用。補體為2應用單位，溶血系統為2％綿羊紅細胞及2單位的溶血素。
皮膚試驗：將豚鼠背部剃毛，用10％同種脊髓生理鹽水懸液0.1ml作皮內注射， 注后當時及24、48小時觀察皮膚反應。本實驗在注后當時不見皮膚反應，而在24小時出現紅斑或硬結，48小時仍存在，所以是延緩型反應。
組織學檢查：在實驗終了時處死動物，取出腦及脊髓等欲檢查的臟器，福爾馬林固定，常規切片、染色作鏡檢。可見脊膜及中央管周圍有明顯的**樣組織浸潤、增厚，脊髓白質內有細胞浸潤的小灶狀病變及靜脈周圍呈套袖樣浸潤。神經細胞有壞死，細胞核消失呈勻質小體，或細胞體消失留下一空隙，以及細胞周圍有圓細胞浸潤等。在腦組織中可見到腦膜增厚，**樣細胞及單核細胞浸潤。室管膜及脈絡膜亦呈同樣變化。小靜脈及****周圍，則呈套袖狀細胞浸潤。腦實質內有小膠質細胞組成的浸潤灶。有些星狀細胞呈核碎裂、胞漿蒼白、細胞變形等。上述變化以脊髓的病理改變和癱瘓*為一致,是*特異的變化，僅見于注射脊髓加FA引起癱瘓的動物。血清抗體雖也有特異性,但與癱瘓或脊髓病變的程度無一致性關系；而皮膚反應則既有特異性，又與癱瘓及脊髓病變呈一致性。文獻報導還曾指出，這種模型不能用血清抗體進行傳遞，但用**細胞被動傳遞則能成功。提示病變的本質屬于細胞**機制。至于腦內的變化,特異性較差,用FA或其它組織懸液加FA注射的動物也能發現，唯程度輕的多，可能是FA本身引起的，也可能因為其它組織和腦脊液之間有某些共同抗原性，從而引起交叉反應之故。常規動物實驗模型制作（復制）方法
八、動物高血壓模型的建立
1.直接刺激**神經法
采用埋藏電極或借助于立位定各器，是刺激大白鼠或猴的側下丘腦防御警覺區，可使動物血壓明顯升高，心率加快和心輸出量增加等。
2.神經反射性高血壓
可選狗進行，以波長0.1毫秒、頻率5～50次/秒的方波刺激狗的隱神經、喉上神經或精神迷走神經**端，刺激時間為15秒，可使狗的收縮壓和舒張壓均升高20～100mmHg。
3.腎源性加壓物質的注射法
選用大白鼠、家兔或狗，實驗前將動物兩側腎臟摘除，手術后幾小時或經24小時后，給動物靜脈注射或滴注腎提取物、腎素或人工合成的血管緊張素（Angiotensin）均可使血壓明顯升高。切除動物腎臟后幾小時，血中血管緊張素原（Angiotensinogen）即開始上升。24小時后可增達高峰，大白鼠血中血管緊張素原值可增加14～15倍，狗約增加3倍。從而大大提高了動物對外源性腎臟加壓物質的敏感性。
4.體液性加壓物質注射法
選用狗、貓或兔按2～8μg/Kg劑量靜脈注射腎上腺素或去甲腎上腺素時，可引起血壓顯著而短暫的升高。給大白鼠靜脈注射0.5～3μg腎上腺素或去甲腎上腺素，亦可出現與上相似的血壓上升。若欲使血壓維持長時期的升高，可采取上述**靜脈滴注給藥。給狗或貓靜脈注射0.1～0.6μ后葉加壓素或給大白鼠靜脈注射0.006～0.008u后葉加壓素，均可導致受試動物的血壓顯著上升，但重復注射易出現耐受現象。
5.**胎盤缺血型急性高血壓法
選用妊娠家兔，通過胎盤作“Z”字形縫合，造成**胎盤缺血，手術后血壓逐漸升高，于1/2～2小時升達高峰。但注意縫線不要穿過**壁，否則將不發生高血壓。
九、附錄
上海欣軟信息科技有限公司是一家專業從事研發銷售科研儀器設備的公司，并服務于神經科學、生理學、細胞生物學、分子生物學等生命科學科研領域。自公司成立以來，憑借先進的軟硬件配置及豐富的安裝經驗，為相關領域的研究人員提供國際上*前沿的實驗成套儀器，滿足各類研究的應用需求。
主營產品 常規動物實驗模型制作（復制）方法
1.學習記憶行為研究：Morris水迷宮、八臂迷宮、巴恩斯迷宮，Y迷宮，T迷宮，穿梭實驗、避暗實驗
2.焦慮抑郁行為研究：高架十字迷宮、zero迷宮、零迷宮、強迫游泳，懸尾實驗，場景恐懼實驗，條件性恐懼實驗，震驚反射實驗，爬梯實驗
3.**成癮行為研究：條件性位置偏愛，cpp實驗，自身給藥系統
4.神經精神行為研究：洞板實驗，自發活動，曠場實驗，聯合開場實驗
5.運動疲勞行為研究：動物實驗跑臺（段氏制造），轉輪疲勞儀，轉棒疲勞儀，福爾馬林疼痛實驗研究系統
6.藥理實驗：stoelting腦立體定位儀，科技型腦立體定位儀（國產研發），生物信號采集系統，足趾容積測量儀等
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