藥理研究中常用學(xué)習(xí)記憶障礙動(dòng)物模型的行為學(xué)分析(1)
藥理研究中常用學(xué)習(xí)記憶障礙動(dòng)物模型的行為學(xué)分析(1)
摘要:目的 本研究對(duì)老年、基底前腦損傷、東莨菪堿注射和雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎大鼠四種藥理研究中常用的學(xué)習(xí)記憶障礙動(dòng)物模型的行為學(xué)表現(xiàn)進(jìn)行了分析。方法 采用水迷宮及曠場(chǎng)分析法對(duì)上述四種動(dòng)物模型組及正常青年對(duì)照和假手術(shù)組進(jìn)行了研究,數(shù)據(jù)采用多因素方差分析法處理。結(jié)果 發(fā)現(xiàn)老年動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶能力減弱, 對(duì)新環(huán)境的緊張程度增強(qiáng),但空間認(rèn)知能力及興奮性無(wú)明顯改變; 基底前腦損傷動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶及空間認(rèn)知能力明顯下降,但興奮性及情緒反應(yīng)正常; 東莨菪堿動(dòng)物模型不但學(xué)習(xí)記憶及空間認(rèn)知能力明顯下降, 而且興奮性異常增強(qiáng);雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶及空間認(rèn)知能力明顯下降, 但興奮性及情緒反應(yīng)正常。
結(jié)論 從行為學(xué)角度將上述四種動(dòng)物模型進(jìn)行了比較,為藥理學(xué)研究應(yīng)用這些模型提供了背景資料。
關(guān)鍵詞:老年性癡呆; 動(dòng)物模型; 行為學(xué)
老年癡呆主要包括Alzheimer. s病和血管性癡呆, 是老年人致殘*嚴(yán)重的**之一, 并且隨著人口的老齡化, 患者日益增多, 將給家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)。因此對(duì)老年性癡呆**的尋求和研究是當(dāng)前醫(yī)學(xué)界的一個(gè)緊迫問(wèn)題。良好的動(dòng)物模型是進(jìn)行該病研究的基礎(chǔ)。目前作為老年癡呆的藥理學(xué)研究常用動(dòng)物模型主要有: M受體阻斷劑東莨菪堿或樟柳堿致動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶障礙模型, 興奮性氨基酸基底前腦注射致動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶障礙模型, 正常老年動(dòng)物模型, 以及雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎動(dòng)物模型等。為更好地了解這四種模型動(dòng)物的行為學(xué)表現(xiàn),我們采用了水迷宮及曠場(chǎng)分析方法對(duì)這四種動(dòng)物模型進(jìn)行了比較觀察, 水迷宮是一種較好地評(píng)定動(dòng)物空間學(xué)習(xí)記憶能力的方法, 而曠場(chǎng)分析能對(duì)動(dòng)物對(duì)新異環(huán)境的興奮性、適應(yīng)性、探究、緊張、記憶等行為進(jìn)行評(píng)價(jià)。
1 材料和方法
1.1.1 動(dòng)物SD大鼠, 雄性, 由北京實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供( 許可證編號(hào)SCXK( 京) 2002-2003) 。
1.1.2 試劑氫溴酸東莨菪堿注射液( Scopolaminehydrobromide) 為上海禾豐制藥有限公司產(chǎn)品( 批號(hào):950901) , 鵝膏覃氨酸( Ibotenic acid, IBO) 為美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品。
1.1.3 模型制備
1.1.3.11 老年動(dòng)物組: 正常24月齡雄性SD大鼠; 青年對(duì)照組為3月齡大鼠。
1.1.3.12 基底前腦損傷大鼠: 采用3月齡SD大鼠,1%****鈉麻醉, 腦立體定位儀固定, 平顱頭位,按大鼠腦定位圖譜, 在AP( 前囟后) : 018mm; ML( 中線(xiàn)旁) : 310mm; DV( 自腦表面深度) : 710mm; 雙側(cè)注射1LL鵝膏覃氨酸( 10LgPLL, 溶于生理鹽水中) 。假手術(shù)對(duì)照組注射等量生理鹽水, 手術(shù)后1個(gè)月進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
1.1.3.13 東莨菪堿模型: 3月齡大鼠, 按5mgPkg體重于實(shí)驗(yàn)前20min腹腔注射氫溴酸東莨菪堿溶液。以上述青年對(duì)照組為對(duì)照。
1.1.3.14 雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎大鼠模型: 采用3月齡SD大鼠, 1%****鈉麻醉, 分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈,用絲線(xiàn)結(jié)扎, 縫合皮膚。雄性動(dòng)物在該體重下的死亡率約為20%, 假手術(shù)對(duì)照組, 分離頸總動(dòng)脈后即縫合皮膚。存活動(dòng)物術(shù)后一個(gè)月進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
1.1.4 儀器
1.1.4.11 morris水迷宮: 上海欣軟信息科技有限公司研制。由醫(yī)用ABS工程塑料制作，,水深40cm, 水溫控制在22e ~ 25e 之間。本裝置共設(shè)4個(gè)盲端, 終點(diǎn)有臺(tái)階, 動(dòng)物可通過(guò)臺(tái)階上岸躲避溺水威脅。
1.1.4.12 曠場(chǎng)分析箱: 鋁合金箱,箱底劃成25方格( 20cm*20cm) , 沿墻格稱(chēng)為外周格, 其余為中央格。
1.1.5 實(shí)驗(yàn)方法
1.1.5.11 動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)定: 各模型及對(duì)照組動(dòng)物依次進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn), 第1d路徑包括2個(gè)盲端,第2d有3個(gè)盲端, 第3、4、5、6d均為4個(gè)盲端。每天訓(xùn)練兩次, 記錄每只動(dòng)物在游泳中進(jìn)入盲端的次數(shù)及游出時(shí)間, 如果120s內(nèi)未上岸, 按120s計(jì)算。
1.1.5.12 曠場(chǎng)分析: 將動(dòng)物放入正中格中, 觀察5min內(nèi)動(dòng)物活動(dòng)情況。室內(nèi)為暗光, 實(shí)驗(yàn)過(guò)程有輕微噪聲。每次實(shí)驗(yàn)后需將屎尿**。采用單盲法, 設(shè)兩位觀察者, 分別觀察每組50%動(dòng)物。觀察指標(biāo)包括: 方格穿行次數(shù)( 三爪以上跨入鄰格的次數(shù)) 、中央格內(nèi)停留時(shí)間、站立次數(shù)( 兩前肢離地1cm以上) 和糞便粒數(shù).
1. 5.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析: 以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果均使用STATISTICA軟件( 美國(guó), StatSofi, Inc) 完成。對(duì)于水迷宮項(xiàng)指標(biāo)首先采用多因素方差分析( 因素包括各處理組、觀測(cè)天數(shù)) 對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行分析, 如果各處理組間有顯著性差異, 再采用post_HocFisher LSD檢驗(yàn)各組間兩兩比較。對(duì)于曠場(chǎng)分析結(jié)果采用t 檢驗(yàn), 進(jìn)行組間比較。
